PRÁCTICA 3: CENTRIFUGACIÓN. LAVADO DE HEMATÍES Y PREPARADO DE UNA SUSPENSIÓN DE HEMATÍES TIPADOS.

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DETERMINACIÓN DE LA VARIANTE DÉBIL DEL SISTEMA RH: Du

I. OBJETIVOS Determinar la presencia de un Du en la superficie eritrocitaria, siendo la variante débil del sistema Rh. II. FUNDAMENTO TEÓRICO El Du es un antígeno D débil, que no suele dar la cara en pruebas normales para el Rh. Primero, sensibilizaremos los hematíes problema con un suero con anticuerpos anti-D. Segundo, los enfrentaremos al suero de Coombs. Si existe el antígeno Du en la superficie de los eritrocitos, se producirá la unión de los anticuerpos anti-D a sus receptores de membrana y por tanto, dará lugar a la aglutinación en presencia del suero Coombs. III. MATERIALES, REACTIVOS Y EQUIPOS -Centrífuga -Pipetas Pasteur -Gradilla -Tubos de ensayo -Baño maría -Vaso de precipitados -Pipeta de vidrio -Micropipeta con sus correspondientes puntas -Suero anti-D humano -Suero de Coombs -Suero fisiológico -Hematíes de la sangre problema previamente lavados 3 veces en solución salina fisiológica y suspendidos al 5%.

PRÁCTICA 14: ESTUDIO DE LA FRAGILIDAD OSMÓTICA DE LOS HEMATÍES

FUNDAMENTO El estudio de la fragilidad osmótica de los hematíes valora la resistencia de los eritrocitos a soluciones de presión osmótica decreciente, en condiciones constantes de pH y de temperatura. Para ello, se enfrentan los hematíes problema a soluciones tamponadas de cloruro sódico cuya concentración es decreciente a partir de 9 gramos por mil (soluciones hipotónicas). Cuando los eritrocitos están en contacto con soluciones hipotónicas, penetra agua a través de su membrana y se hinchan. Al hincharse los hematíes, una parte de la Hb que contienen puede salir al exterior a través de los poros de su membrana. Si la entrada de líquido es excesiva, los hematíes se rompen y dejan libre toda la Hb que engloban (hemólisis). En condiciones normales, un eritrocito puede aceptar sin hemolizarse una entrada de agua que incremente su volumen en un 70 % como máximo. Esta prueba evalúa por tanto la capacidad que tienen los glóbulos rojos de soportar un incremento de su cont...

PRÁCTICA 19: DETERMINACIÓN DE LA CONCENTRACIÓN DE HIERRO (SIDEREMIA) Y CAPACIDAD E FIJACIÓN TOTAL DEL HIERRO (CTFH)

A. DETERMINACIÓN DEL HIERRO SERICO (SIDEREMIA) I. OBJETIVO Determinar la sideremia: la cantidad de hierro en sangre, en el plasma, utilizando el espectrofotómetro. II. FUNDAMENTO Se trata de un método colorimétrico de la casa Spinreact que utiliza como muestra plasma. Primero, se separa el hierro de la transferrina y a través del ácido ascórbico pasarlo a ión ferroso, que en presencia de Ferrozine forma un complejo coloreado cuya intensidad es proporcional a la concentración de hierro en la muestra. El procedimiento que seguimos es el llenado de las cubetas. A continuación se mezclan bien y se dejan incubar durante unos 10 minutos para por último medir su absorbancia en el espectrofotómetro. Para realizar los cálculos posteriores es importante saber que la concentración del patrón es de 100 µg/dl. B. DETERMINACIÓN DE CFTH (CAPACIDAD TOTAL DE FIJACIÓN DEL HIERRO) I. FUNDAMENTO La transferrina sérica se satura con un exceso de Fe 3+ y el exceso no fijado ...

Hematología con Carla

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