PRÁCTICA 18: DETERMINACIÓN CUANTITATIVA DE HEMOGLOBINA

 

I. OBJETIVO

Determinar la concentración de Hemoglobina, aprender hacer curvas de calibración y patrones para ello. También saber realizar medidas y cálculos matemáticos de absorbancia y concentración con el espectrofotómetro.

 

II. FUNDAMENTO

Se basa en la transformación de la hemoglobina en CIANMETAHEMOGLOBINA, al añadir a la muestra de sangre ciertos componentes del reactivo de DRABKIN. En primer lugar, el Fe²⁺ se oxida a Fe³⁺, dando lugar a metahemoglobina.

Hb Fe (II)+ Fe (III) (CN)₆ ^{3 -----------}    Hb Fe (III)+ Fe (III) (CN)₆ ⁴  

Luego, en presencia de cianuro potásico, pasa a cianmetahemoglobina, de color rojo y con un pico de absorción máximo a 540 nm y cuya concentración puede ser determinada por métodos colorimétricos, empleando un patrón de concentración conocida.

Hb Fe (III)+  CN^{-  ---------}Hb Fe (III) CN